Descripción
Objetivo 1. Determinar el efecto de los compuestos (R1–R10) en marcadores del proceso inflamatorio en cultivos celulares in vitro estimulados con resistina.
Brevemente, se utilizarán líneas celulares de páncreas, fibroblastos y células cancerígenas MDA-MB-231, MCF-7, PC-3, BT-474 y HeLa (ATCC). Se evaluará el efecto en la expresión de marcadores del proceso inflamatorio generado por resistina recombinante. Para ello, se emplearán anticuerpos anti-NF-κB, anti-resistina, anti-IL-6, anti-IL-8, anti-AMPK, anti-PI3K, anti-mTOR y anti-actina, mediante ensayos de Western blot. Los cultivos celulares se incubarán con concentraciones de 1 a 100 μM de cada compuesto, siguiendo la metodología previamente reportada.
Objetivo 2. Determinar el efecto de los compuestos (R1–R10) en la migración celular en cultivos celulares in vitro estimulados con resistina.
Brevemente, se utilizarán líneas celulares MDA-MB-231, MCF-7, PC-3, BT-474 y HeLa (ATCC). Se evaluará la migración celular inducida por resistina recombinante y los cultivos celulares se incubarán con concentraciones de 1 a 100 μM de cada compuesto, siguiendo la metodología reportada.
Objetivo 3. Determinar el efecto citotóxico y la inducción de apoptosis de los compuestos (R1–R10) en cultivos celulares in vitro.
Se determinará el efecto citotóxico y la concentración inhibitoria media (IC₅₀) de los compuestos en cultivos de células de cáncer, tal como se ha reportado previamente mediante ensayos de MTT, así como la posible inducción de apoptosis en aquellos cultivos que presenten efecto citotóxico.
Ensayo de apoptosis.
Se realizará un ensayo de anexina V para determinar la muerte celular por apoptosis en las diferentes líneas celulares, utilizando un kit de detección de apoptosis Annexin V-Cy3 (Sigma).
Objetivo 4. Determinar el efecto de los compuestos (R1–R10) en un modelo murino de obesidad.
Se evaluará el efecto de los diez compuestos seleccionados como posibles inhibidores de la resistina en un modelo murino de obesidad. Para ello, se utilizarán ratones macho de la cepa CD-1, organizados en grupos de seis animales. Los ratones serán alimentados con dieta hipercalórica, con acceso ad libitum a agua y alimento. Se establecerá un grupo por cada compuesto (10 grupos, dosis de 10 mg/kg/día), un grupo control negativo (vehículo, sin tratamiento) y un grupo control positivo tratado con Orlistat (5 mg/kg/día).
Objetivo 5. Determinar las interacciones de los mejores compuestos con la resistina recombinante humana mediante ensayos de fluorescencia, ELISA y espectrometría de masas, en aquellos compuestos que presenten resultados favorables en los objetivos 1 al 4.
Se determinará la interacción de los compuestos seleccionados con la resistina recombinante en relaciones 10:1 y 20:1, con el fin de relacionar el efecto biológico observado con la interacción compuesto–resistina.
Objetivo 6. Determinar la toxicidad de los compuestos mediante ensayos de citotoxicidad, determinación de apoptosis y cálculo de la dosis letal media (LD₅₀), en aquellos compuestos que presenten resultados favorables en los objetivos 1 al 4.
Objetivo 7. Determinar, mediante estudios de dinámicas moleculares, la probable interacción de los mejores compuestos con la resistina y sus posibles efectos en los receptores conocidos.
Se propondrá una descripción detallada de la interacción entre la resistina regulada o inhibida y cada compuesto, integrando los resultados experimentales con el análisis teórico-computacional (relación experimental–teórica).
Problemática
Actualmente, los problemas sociales y la pandemia han hecho que los problemas relacionados con la nutrición de la población sean más notorios, por lo que se podría proponer que, al controlar y mejorar el peso corporal, se podrían evitar varias enfermedades. Pero es claro que los problemas de sobrepeso y obesidad continuarán durante esta década, lo que hace necesario incrementar los esfuerzos para reducir estos factores de riesgo que generan condiciones adversas, como el aumento de la grasa adiposa, mayor liberación de adipocinas, aumento de citocinas proinflamatorias y todo ello contribuye a generar resistencia a la insulina y/o hiperglucemia, que incluso favorecen condiciones para el desarrollo y proliferación de algunos tipos de cáncer.
Objetivo
Evaluar la interacción de compuestos que regulen la resistina, con el fin de determinar sus efectos en el proceso inflamatorio celular, la viabilidad de cultivos celulares de cáncer y su impacto en un modelo murino de obesidad.
Impacto
El Objetivo 1 se encuentra en proceso, ya que aún falta evaluar dos anticuerpos en las líneas celulares: PI3K y mTOR. A la fecha, se ha avanzado aproximadamente el 90 % de este objetivo y se prevé su conclusión durante el mes de diciembre de 2024, periodo en el cual ya se ha logrado identificar la regulación de mensajeros involucrados en el proceso inflamatorio.
Estos ensayos se han realizado en la Facultad de Medicina de la Universidad Autónoma de Baja California, con la participación de estudiantes de licenciatura y de la Maestría en Ciencias del posgrado de esta Facultad. Los resultados obtenidos hasta el momento son altamente relevantes, ya que se ha demostrado una disminución significativa de dichos mensajeros, así como una reducción en la migración de cultivos in vitro de células cancerígenas.
El Objetivo 2 se encuentra realizado. Esta actividad demostró que tres de los diez compuestos evaluados disminuyen la migración celular en el ensayo de cierre de herida. Como resultado de este objetivo, se encuentra en proceso la elaboración del primer artículo científico relacionado con el apoyo de esta convocatoria, en el cual participan tres investigadores de la Facultad, dos médicos pasantes del servicio social y un estudiante de Maestría.
En conjunto, el proyecto está demostrando resultados sobresalientes en la regulación de mensajeros del proceso inflamatorio y su relación con la migración y proliferación de células de cáncer.